Electrophoretic analysis (sds-page) of canine urinary proteins according to the stage of chronic kidney disease / [Análise eletroforética (SDS-PAGE) de proteínas urinárias de cães de acordo com o estágio da doença renal crônica]

Glomerular proteinuria is characterized by the loss of high-molecular-weight proteins (HMWPs), while tubulointerstitial proteinuria is characterized by the loss of low-molecular-weight proteins (LMWPs). The objective was to assess the molecular weight of urinary proteins (MWUP) in dogs with naturally acquired CKD and determine the proportion of HMWPs and LMWPs according to CKD stage. Twenty-eight dogs with CKD were recruited and divided into 4 groups based on serum creatinine (Cr) levels (group1: Cr<1,4, n=8; group2: 1,45,0, n=5). The control group consisted of 5 healthy dogs. The MWUP was determined by SDS-PAGE. The urinary protein-to-creatinine ratio (UP/C) was used to quantitatively assess proteinuria. The electrophoresis pattern revealed a proportionally greater loss of HMWPthan of LMWP in all groups with CKD and an increased loss of LMWP in group 4 (P<0.05). These results suggest a predominance of glomerular injuries throughout all stages of CKD in these dogs and an increase in tubulointerstitial injury towards the end-stage of the disease. The results of the present study support the recommendation of SDS-PAGE as an effective technique for the qualitative assessment of proteinuria, as well as a method for assessing the severity and location of renal injury.(AU)

A proteinúria glomerular é caracterizada pela perda de proteínas de alto peso molecular (PAPM), enquanto a proteinúria tubulointersticial se caracteriza pela perda de proteínas de baixo peso molecular (PBPM). O objetivo do trabalho foi determinar o peso molecular das proteínas urinárias (PMPU) de cães com DRC naturalmente adquirida e a proporção de PAPM e PBPM de acordo com o estágio da DRC. Foram utilizados 28 cães com DRC, divididos em quatro grupos, de acordo com o nível sérico de creatinina (cr) (grupo 1: cr<1,4, n=8; grupo 2: 1,45,0, n=5). O grupo controle era composto por cinco cães saudáveis. O PMPU foi determinado por SDS-PAGE. A relação proteína:creatinina urinária (RPCU) foi utilizada como um método quantitativo de proteinúria. A eletroforese revelou uma perda proporcionalmente maior de PAPM, quando comparada às PBPM, em todos os grupos de DRC, bem como uma perda crescente de PBPM no grupo 4 (P<0,05). Esses resultados sugerem uma predominância de lesão glomerular em todos os estágios de DRC nesses cães e uma progressão crescente na lesão túbulo-intersticial no estágio terminal da doença. Os resultados deste estudo reafirmam a recomendação de que a eletroforese de proteínas urinárias é uma técnica qualitativa efetiva de avaliação da proteinúria, bem como um método que permite avaliar a extensão e a localização da lesão renal.(AU)

Modified comet assay with Giemsa staining: a suitable method for assessing genotoxicity in rats / Ensaio cometa modificado com coloração de Giemsa: um método adequado para avaliar a genotoxicidade em ratos

The present study tested a comet assay that was modified for compatibility with Giemsa staining to assess the drug genotoxicity in the peripheral blood of rats. We analysed the peripheral blood of 16 female Wistar rats (N=8 rats/group) from a control group and from a group that was treated with an intraperitoneal injection of 50mg cyclophosphamide/kg. The comet assay was carried out with modifications of the blood volume and immersion time in the lysing solution and different combinations of electrophoresis conditions (running time, voltage and current), to Giemsa staining. The lysing time and electrophoresis conditions allowed for the expression of all classes of DNA damage during the electrophoresis run, and the comets were efficiently stained with Giemsa. The technique showed high reproducibility for the DNA classes. The results demonstrate that the modified comet assay with Giemsa staining can be standardized for routine laboratory procedures using a 20µL blood sample, 3h and 30min immersions in the lysing solution and electrophoresis runs with 23 to 25 V and 310 and 360mA of electrical current. The modified comet assay with Giemsa staining that was described in the present study was standardized to be applied in the laboratory routine.(AU)

O presente estudo testou um ensaio cometa modificado para a coloração de Giemsa para avaliar a genotoxicidade de fármacos no sangue periférico de ratos. Analisou-se o sangue periférico de 16 ratas Wistar (n=8 ratas/grupo) de um grupo controle e de um grupo que foi tratado com uma injeção intraperitoneal de 50mg/kg pv. de ciclofosfamida. O ensaio cometa foi realizado com modificações do volume sanguíneo e do tempo de imersão na solução de lise, bem como com diferentes combinações de condições de eletroforese (tempo de corrida, tensão e corrente), para coloração de Giemsa. O tempo de lise e as condições de eletroforese permitiram a expressão de todas as classes de danos no DNA durante a corrida de eletroforese, e os cometas foram eficientemente corados com Giemsa. A técnica mostrou alta reprodutibilidade para as classes de DNA. Os resultados demonstram que o ensaio cometa modificado com coloração de Giemsa foi padronizado para procedimentos laboratoriais de rotina usando-se uma amostra de sangue de 20µL, 3h30min de imersão na solução de lise e eletroforese com 23 a 25 V e 310 e 360mA. O ensaio cometa modificado com coloração de Giemsa descrito foi padronizado para ser aplicado na rotina laboratorial.(AU)

Relação do proteinograma sérico e as fases folicular e luteal do ciclo estral em éguas / Relation of the serum proteins and the follicular and luteal phases of the estrous cycle in mares

O objetivo deste estudo foi obter o perfil eletroforético das proteínas séricas em éguas cíclicas e verificar as diferenças entre as fases folicular e luteal do ciclo estral nesta espécie. Foram utilizadas 18 éguas, totalizando 36 amostras de soro, sendo duas de cada égua. As amostras foram colhidas no estro e no diestro. As proteínas séricas totais foram obtidas pelo método do Biureto, a partir da utilização de Kits comerciais (LABTEST) e, as diferentes subfrações proteicas, por eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE). O eletroforetograma das proteínas séricas colocou em evidência a presença de 17 a 25 frações proteicas, cujos pesos moleculares variaram de 22 a 254 kDa. Identificaram-se duas proteínas ainda não nomeadas oficialmente, de massas moleculares (MM) 23 kDa e 144 kDa. Os valores médios ± SEM obtidos para cada variável no estro e no diestro, respectivamente, foram: proteínas totais (g/dL) 7,11 ± 0,07 e 7,36 ± 0,07; albumina (mg/dL) 4790,83 ± 69,10 e 5027,19 ± 69,10; α1 glicoproteína ácida (mg/dL) 4,90 ± 0,31 e 4,93 ± 0,31; ceruloplasmina (mg/dL) 15,28 ± 1,31 e 10,65 ± 1,31; haptoglobina (mg/dL) 22,70 ± 1,16 e 27,06 ± 1,16; transferrina (mg/dL) 329,00 ± 9,78 e 350,16 ± 9,78; IgA (mg/dL) 119,91 ± 6,30 e 107,03 ± 6,30; IgG (mg/dL) 1525,07 ± 40,18 e 1517,25 ± 40,18; MM 23 (mg/dL) 204,44 ± 8,61 e 219,79 ± 8,61; MM 144 (mg/dL) 22,13 ± 0,55 e 21,49 ± 0,55. Não houve diferença significativa das proteínas totais e suas frações do estro para o diestro. Conclui-se que as modificações hormonais durante as fases do ciclo estral da égua não interferem no proteinograma sérico.

This study aimed to obtain the electrophoretic profile of serum proteins in cyclic mares and to verify the differences between the follicular and luteal phases of the estrous cycle in this species. Eighteen mares were used, totaling 36 serum samples, two of each mare. Samples were collected both in estrus and in diestrus. Total serum proteins were obtained by the Biureto method, by using commercial kits (LABTEST), while the different protein subfractions by polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). The electroforetogram of serum proteins evidenced the presence of 17 to 25 protein fractions, whose molecular weights ranged from 22 to 254 kDa. Two proteins that were not yet officially named were identified, of molecular weights (MW) of 23 kDa and 144 kDa. The mean values (± SEM) obtained for each variable in estrus and diestrus were, respectively: total proteins (g/dL) 7.11 ± 0.07 and 7.36 ± 0.07; albumin (mg/dL) 4790.83 ± 69.10 and 5027.19 ± 69.10; α1 acid glycoprotein (mg/dL) 4.90 ± 0.31 and 4.93 ± 0.31; ceruloplasmine (mg/dL) 15.28 ± 1.31 and 10.65 ± 1.31; haptoglobine (mg/dL) 22.70 ± 1.16 and 27.06 ± 1.16; transferrin (mg/dL) 329.00 ± 9.78 and 350.16 ± 9.78; IgA (mg/dL) 119.91 ± 6.30 and 107.03 ± 6.30; IgG (mg/dL) 1525.07 ± 40.18 and 1517.25 ± 40.18; MW 23 (mg/dL) 204.44 ± 8.61 and 219.79 ± 8.61; MW 144 (mg/dL) 22.13 ± 0.55 and 21.49 ± 0.55. No significant difference was verified in total proteins and its fractions in estrus and diestrus. The hormonal changes during the specific stages of the estrous cycle of the mare do not interfere with the serum proteinogram.

Serum proteinogram and biochemistry of Holstein cows in the peripartum period / Proteinograma e bioquímica séricas de vacas da raça Holandesa no período periparto

In face of the few reports found in national literature analyzing the potential influence of parturition number in serum proteinogram and biochemical profile in the peripartum period of high yielding dairy cows, the aim of the present study was to comparatively evaluate the dynamics of these serum constituents' concentrations in blood samples obtained from primiparous and multiparous Holstein cows, 60 and 30 days prepartum and in the day of parturition. Data were analyzed by repeated measures variance analysis (ANOVA) and differences between groups and moments were analyzed by Tukey's test. Results were considered significant when P<0.05. Parity influenced levels of total protein, albumin, globulins, magnesium, cholesterol, which were higher in multiparous cows, as well as concentrations of ceruloplasmin, total calcium, chloride and alkaline phosphatase activity, which were higher in primiparous cows. Parturition influenced serum concentrations of ceruloplasmin (+58%), transferrin (-25%), haptoglobin (+33%), total protein (-17%), globulins (-25%), immunoglobulin A (-43%), immunoglobulin G (-24%), total calcium (-12%), inorganic phosphorus (-10%), chloride (+5%), sodium (+4%), cholesterol (-23%), triglycerides (-38.6%), as well as activities of aspartate aminotransferase (+14%) and alkaline phosphatase (+28%). A decrease in serum levels of total calcium, inorganic phosphorus, cholesterol and triglycerides was more pronounced in multiparous than in primiparous cows. These results demonstrate that the interpretation of proteinogram and serum constituents should take into consideration lactation number and the moment of parturition as relevant factors in high yielding dairy cows in the transition period.(AU)

Diante da escassez de relatos encontrados na literatura nacional quanto à potencial influência do número de parições sobre o proteinograma sérico e perfil bioquímico no período periparto de vacas leiteiras de alta produção, o objetivo do presente estudo foi avaliar comparativamente a dinâmica de constituintes séricos em amostras de sangue obtidas de vacas da raça Holandesa primíparas e pluríparas, 60 e 30 dias pré-parto e no dia do parto. Os resultados foram avaliados por análise de variância (ANOVA) com medidas repetidas no tempo e as diferenças entre grupos e entre momentos foram analisadas pelo teste de Tukey, sendo os resultados considerados significativos quando P<0,05. O número de parições influenciou os teores de proteína total, albumina, globulinas, magnésio e colesterol, que foram maiores em vacas pluríparas, bem como as concentrações de ceruloplasmina, cálcio total, cloreto e atividade de fosfatase alcalina, que foram maiores em vacas primíparas. O número de parições influenciou as concentrações séricas de ceruloplasmina (+58%), transferrina (-25%), haptoglobina (+33%), proteína total (-17%), globulinas (-25%), imunoglobulina A (-43%), imunoglobulina G (-24%), cálcio total (-12%), fósforo (-10%), cloretos (+5%), sódio (+4%), colesterol (-23%), triglicérides (-38.6%), bem como as atividades de aspartato aminotransferase (+14%) e fosfatase alcalina (+28%). A diminuição do teor sérico de cálcio total, fósforo, colesterol e triglicérides foi mais acentuada em vacas pluríparas do que em vacas primíparas. Esses resultados mostram que a interpretação do proteinograma e dos constituintes séricos deve levar em consideração o número de lactações e a ocorrência do parto como fatores relevantes em vacas leiteiras de alta produção no período de transição.(AU)

Urine protein electrophoresis study in dogs with pituitary dependent hyperadrenocorticism during therapy with trilostane / Avaliação da proteína urinária por eletroforese em cães com hiperadrenocorticismo hipófise dependente durante a terapia com trilostano

Hyperadrenocorticism is one of the most common endocrine disorders in dogs. Regarding to the kidneys, chronic hypercortisolemia can cause damage to the glomerulus, and evolve into chronic kidney disease. This study evaluated nine normotensive dogs with pituitary dependent hyperadrenocorticism, before and after therapy with trilostane, during the follow-up period of six months, in order to investigate the development of pathological proteinuria by quantitative (urinary protein-to-creatinine ratio) and qualitative (urinary protein electrophoresis) methods, and also to monitor its intensity over the course of the disease and therapy. The main renal lesion detected in dogs with hyperadrenocorticism was in the tubular segment, evidenced by the prevalence of urinary protein bands of lower molecular weight, indicating the lack absorption of these proteins in the proximal segment of the nephron. Low molecular weight proteins persisted throughout the follow-up. Regarding the future of routine veterinary medical clinic in the care of patients with hyperadrenocorticism, the assessments of proteinuria determinations by the urinary protein-to-creatinin ratio and urinary protein electrophoresis, according to the results obtained in this study, can add more information about the renal damage in these animals, and contribute to the prognosis.(AU)

Hiperadrenocorticismo (HAC) é uma das doenças endócrinas mais comuns em cães. A hipercortisolemia crônica pode causar danos glomerulares, pelo aumento da taxa de filtração glomerular, podendo levar ao desenvolvimento de doença renal crônica. Este estudo avaliou nove cães normotensos com hiperadrenocorticismo hipófise-dependente, antes e após a terapia com trilostano, durante o período de acompanhamento de seis meses, a fim de investigar o desenvolvimento de proteinúria patológica por métodos quantitativo (relação proteína e creatinina urinária) e qualitativos (eletroforese de proteínas urinárias) e também para monitorar a sua intensidade ao longo do curso da doença e terapia. A principal lesão renal detectada em cães com HAC foi no segmento tubular, evidenciada pela prevalência de bandas de proteínas urinárias de peso molecular mais baixo, indicando a falta de absorção destas proteínas no segmento proximal do néfron. A proteinúria de baixo peso molecular persistiu durante todo o acompanhamento. Em relação ao futuro da rotina clínica médica veterinária no tratamento de cães com hiperadrenocorticismo, as avaliações de proteinúria pela relação proteína e creatinina urinária e eletroforese de proteínas urinárias, de acordo com os resultados obtidos neste estudo, podem adicionar mais informações sobre a lesão renal nestes animais e contribuir para o prognóstico.(AU)

Pesquisa de hemoglobinopatias em cães da região metropolitana do Rio de Janeiro portadores de anemia crônica / Search for hemoglobinopathies in dogs with chronic anemia in the metropolitan region of Rio de Janeiro

Talassemias e hemoglobinopatias são condições hereditárias encontradas em humanos de todo o mundo. Em medicina veterinária, o polimorfismo de hemoglobinas tem sido estudado em animais de produção, mas não existem relatos de hemoglobinopatias em cães, e os estudos envolvendo o polimorfismo de hemoglobinas nesta espécie são escassos. Com o objetivo de pesquisar variantes da hemoglobina em cães, foram coletadas amostras de sangue de 202 caninos de variadas raças, sendo 130 portadores de anemia crônica (Grupo Experimental) e 72 animais clinicamente saudáveis (Grupo Controle). Estas amostras foram submetidas à eletroforese alcalina de hemoglobinas, que permitiu a separação e quantificação das frações de hemoglobina por densitometria, e posteriormente submetidas à eletroforese de hemoglobinas em meio ácido, técnica utilizada em medicina humana para a separação de frações de hemoglobinas variantes que não se diferenciam em meio alcalino. O eritrograma e índices hematimétricos foram obtidos concomitantemente. Os métodos utilizados demonstraram que a HbA é o maior componente da hemoglobina canina, e que uma pequena quantidade de HbA2 pode ser detectada em uma parcela dos animais avaliados, sendo que a maioria dos caninos apresentava exclusivamente HbA em sua composição. Concluiu-se que a presença ou ausência de HbA2 não interfere nos índices hematimétricos dos animais avaliados, e que quando comparadas as hemoglobinas dos grupos Experimental e Controle, não são observadas diferenças na distribuição das frações destas, além de não serem observadas hemoglobinas variantes nos caninos avaliados.(AU)

Thalassemias and hemoglobinopathies are hereditary conditions found in humans throughout the world. In veterinary medicine, hemoglobin polymorphism has been studied in production animals, but there are no reports of hemoglobinopathies in dogs, and studies involving hemoglobin polymorphism in this species are scarce. In order to search for hemoglobin variants in dogs, blood samples were collected from 202 dogs of various breeds, being 130 patients with chronic anemia (Experimental Group) and 72 clinically healthy animals (Control Group). These samples were subjected to alkaline electrophoresis of hemoglobin, which permitted separation and quantification of hemoglobin fractions by densitometry, and then subjected to hemoglobin electrophoresis in an acid medium, a technique used in human medicine for the separation of variant fractions of hemoglobin that do not differentiate in an alkaline medium. The erythrogram and RBC indices were obtained concurrently. The methods demonstrated that HbA is the major component of canine hemoglobin, and a small amount of HbA2 can be detected in some of the evaluated animals, and most dogs showed only HbA in its composition. It was concluded that the presence or absence of HbA2 does not interfere with RBC indices of evaluated animals, and the comparison between the hemoglobin of Experimental and Control groups showed no differences in fractions distribution between them, and there was no hemoglobin variants in evaluated canines.(AU)

Molecular analysis of CIB4 gene and protein in Kermani sheep

The human calcium- and integrin-binding protein (CIB) family is composed of CIB1, CIB2, CIB3, and CIB4 proteins and the CIB4 gene affects fertility. Kermani sheep is one of the most important breeds of Iranian sheep breeds. The aim of this study was to analyze for the first time molecular characteristics of the CIB4 gene and protein in Kermani sheep. Different tissues were collected from the Kermani sheep and real time PCR was performed. The PCR products were sequenced, comparative analyses of the nucleotide sequences were performed, a phylogenetic tree was constructed, and different characteristics of CIB4 proteins were predicted. Real time PCR results showed that the CIB4 gene is expressed only in testis of Kermani sheep. The cDNA nucleotide sequence was identical with small tail Han sheep, cattle, goat, camel, horse, dog, mouse and human, respectively 100, 99, 99, 98, 98, 96, 96, and 96%. Hence, it can be suggested that the CIB4 gene plays a role in male fertility. Based on the phylogenetic analysis, sheep CIB4 gene has a close relationship with goat and cattle first, and then with camel and whale. Although we demonstrated that CIB4 is a testis-specific gene, expressed only in the testis and it interacts with other proteins, the mechanisms by which CIB4 expression is regulated need to be elucidated.

Perfil eletroforético do colostro de ovelhas suplementadas com propileno glicol e cobalto associado à vitamina B12 no final da gestação / Electrophoretic profile of the colostrum of ewes supplemented with propylene glycol and cobalt associated with vitamin B12 in late pregnancy

Este trabalho teve por objetivo avaliar o proteinograma do colostro de ovelhas submetidas a administração de propileno glicol e de cobalto associado à vitamina B12 no final da gestação. Dezoito ovelhas da raça Santa Inês, prenhas e com idade variando entre 18 meses a cinco anos foram distribuídas, por amostragem probabilística em três grupos experimentais, aproximadamente 30 dias antes da data prevista para o parto. No Grupo 1 (G1/n=6) foram administrados 30mL de propileno glicol P.A. via oral diariamente; no Grupo 2 (G2/n=6) foi administrado 1mg de cloreto de cobalto em solução a 1% via oral diariamente e 2mg de vitamina B12, via intramuscular semanalmente e no Grupo 3 (G3/n=6): grupo controle. Logo após o parto procedeu-se a colheita de 30mL de colostro, que foram acondicionados em recipientes apropriados e encaminhados ao laboratório. Após homogeneização, adicionou-se a cada 1.000µL de colostro, 75µL de solução de renina, que foi mantido em banho-maria a 37ºC por aproximadamente 20 minutos e centrifugado a 21.000G durante dez minutos em centrífuga refrigerada. Posteriormente, a fração intermediária, correspondente ao soro do colostro, foi aliquotada e mantida em ultrafreezer a -80oC para posterior determinação das proteínas. A determinação da proteína total do soro colostral foi realizada empregando-se reagente comercial. A separação das proteínas foi realizada utilizando-se a técnica de eletroforese em gel de poliacrilamida contendo dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE). Foram identificadas as proteínas IgA, lactoferrina, albumina, IgG de cadeia pesada (IgGCP), ß-caseína, IgG de cadeia leve (IgGCL), ß-lactoglobulina and α-lactoalbumina, não havendo influência da administração dos suplementos na fase final da gestação sobre as concentrações protéicas do colostro.(AU)

This study aimed to evaluate the proteinogram of the colostrum of ewes submitted to administration of propylene glycol and cobalt associated with vitamin B12 in late pregnancy. Eighteen pregnant Santa Inês ewes 18 months to 5 years old were distributed by probabilistic sampling into three experimental groups, about 30 days before the expected delivery date. In group 1 (G1/n=6), daily oral doses of 30ml propylene glycol PA were administered; Group 2 (G2/n=2) received a daily oral dosage of 1mg cobalt chloride in 1% solution and 2mg of vitamin B12 intramuscularly once a week, and Group 3 (G3/n=6) was the control group. Soon after delivery 30mL of colostrum was harvested from each ewe, which were stored in appropriate containers and sent to the laboratory. After homogenization, we added to each 1000µL of colostrum 75µL solution of rennin, which was kept in a water bath at 37°C for about 20 minutes and centrifuged at 21.000G for 10 minutes in a refrigerated centrifuge. Later, the intermediate fraction, corresponding to colostrum whey, was aliquoted and kept in a -80oC ultrafreezer for subsequent determination of proteins. The determination of the total colostral protein whey was performed using a commercial reagent, observing the linearity test for colostrum. The separation of proteins was performed using the technique of electrophoresis on polyacrylamide gel containing sodium dodecyl sulfate (SDS-PAGE). Lactoferrin, IgA, albumin, IgG heavy chain (IgGCP), ß-casein, IgG light chain (IgGCL), ß-lactoglobulin and α-lactalbumin proteins were identified. There was no influence of the administration of supplements during late pregnancy on the concentration of proteins identified in the colostrum of the ewes.(AU)

Detecção molecular e isolamento de Mycoplasma spp. em psitacídeos no estado de Pernambuco, Brasil / Molecular detection and isolation of Mycoplasma spp. in psittacines in Pernambuco state, Brazil

Objetivou-se com este estudo investigar a ocorrência de Mycoplasma spp., Mycoplasma galissepticum (MG) e Mycoplasma synoviae (MS) em psitacídeos de cativeiro localizado no estado de Pernambuco, Brasil. Foram estudadas 85 aves provenientes do Parque Estadual Dois Irmãos, localizado no estado do Pernambuco, Brasil. De cada psitacídeo analisado foram obtidas três amostras por meio de swabs da cloaca, palato e conjuntiva totalizando 255 amostras. As amostras coletadas foram submetidas à extração de DNA e à reação em cadeia da polimerase (PCR), sendo as positivas submetidas ao isolamento em ágar Frey. O DNA de Mycoplasma spp. foi detectado em 16,47% (14/85) dos psitacídeos estudados. Das 255 amostras analisadas, 6,66% (17/255) foram positivas para a presença de Mycoplasma spp., sendo 41,18% (7/17) provenientes da conjuntiva, 35,29% (6/17) do palato e 23,53% (4/17) da cloaca. Nenhuma amostra foi positiva para MG ou MS na PCR. Os resultados obtidos permitem confirmar a presença do DNA de Mycoplasma spp. em conjuntiva, palato e cloaca nas aves estudadas. Foram detectadas colônias semelhantes a membros da classe Mollicutes em 17,64% das amostras (3/17). Esse é o primeiro relato da presença de Mycoplasma spp. em psitacídeos de cativeiro no Nordeste do Brasil.

The aim of this study was to investigate the occurrence of Mycoplasma spp., Mycoplasma galissepticum (MG) and Mycoplasma synoviae (MS) in captive psittacines. Eighty-five wild birds from Parque Estadual Dois Irmãos, Pernambuco state, northeastern Brazil, were used. From each psittacid analyzed three samples were obtained through cloaca, palate and conjunctiva swabs, totaling 255 samples. Samples collected were submitted to DNA extraction and Polimerase Chain Reaction (PCR). Mycoplasma spp. DNA was detected in 16.47% (14/85) of psittacines studied. From 255 samples, 6.66% (17/255) were positive for Mycoplasma spp.: 41.18% (7/17) of positivity in conjunctiva, 35.29% (6/17) in palate and 23.53% (4/17) in cloaca. There was no positive sample for MG or MS in PCR. Similar colonies were found for members of the Mollicutes Class in 17.64% of the samples (3/17). The results confirmed Mycoplasma spp. DNA in conjunctiva, palate and cloaca from the wild birds analyzed. This is the first record of Mycoplasma spp. in captive psittacines from northeastern Brazil.

Detection, quantification and genetic variability of Mycoplasma hyopneumoniae from apparently healthy and pneumonic swine / Detecção, quantificação e variabilidade genética de Mycoplasma hyopneumoniae a partir de suínos pneumônicos e aparentemente saudáveis

Molecular differences among Mycoplasma hyopneumoniae strains present in pneumonic lungs of swine have been largely studied. However, no comparative studies concerning the strains present in apparently healthy pigs have been carried out. This study aimed to detect, quantify and perform molecular analysis of M. hyopneumoniae strains in pig lungs with and without pneumonic lesions. The detection of M. hyopneumoniae was performed using multiplex PCR (YAMAGUTI, 2008), real-time PCR (STRAIT et al., 2008) and multiple VNTR amplification (VRANCKX et al., 2011). Molecular characterization of the strains was achieved by analysis of the VNTR copy number in P97R1, P146R3, H2R1 and H4. M. hyopneumoniae was detected in samples from healthy and pneumonic pigs and the amount of M. hyopneumoniae positive samples detected varied with the type of assay. The greater number of positive samples was identified by the multiple VNTR amplification combined with capillary electrophoresis. Using real-time PCR, 4.9*104 M. hyopneumoniae genome copies/mL was detected in apparently healthy lungs. A mean quantity of 3.9*106 M. hyopneumoniae genome copies/mL was detected in pneumonic lungs. The analysis of VNTR copy number demonstrated a high genetic variability of the M. hyopneumoniae strains present in apparently healthy and pneumonic lungs. Strains having 3 VNTR copy number in P97R1, were detected only in pneumonic lungs and strains having 40 and 43 VNTR copy number in P146R3 were detected only in apparently healthy lungs. Despite the genetic variability of M. hyopneumoniae, predominant strains in the swine farms could be identified...

As diferenças moleculares entre as estirpes de Mycoplasma hyopneumoniae presentes em pulmões de suínos com pneumonia tem sido estudadas. Porém, estudos comparativos relativos as estirpes presentes nos suínos aparentemente saudáveis não foram levados a cabo. O objetivo do estudo foi a detecção, quantificação e analise molecular de M. hyopneumoniae nos pulmões suínos com e sem lesões pneumônicas. Para a detecção de M. hyopneumoniae usaramse o PCR Multiplo (YAMAGUTI, 2008), o PCR a Tempo Real (STRAIT et al., 2008) e a amplificação de múltiplo VNTR (VRANCKX et al., 2011). A caracterização molecular das estirpes foi realizada mediante a análise do número de copias de VNTR em P97R1, P146R3, H2R1 e H4. O M. hyopneumoniae foi detectado em amostras de suínos saudáveis e pneumônicos e a quantidade de M. hyopneumoniae nas amostras positivas variou com o tipo de ensaio. O maior número de amostras positivas foi identificado pela amplificação de múltiplas VNTR combinado com a eletroforese de capilares. Usando o PCR a Tempo Real, 4.9*104 copias de genoma/mL de M. hyopneumoniae foram detectadas em pulmões aparentemente saudáveis. Uma quantidade média de 3.9*106 copias de genoma/mL de M. hyopneumoniae foi detectada em pulmões pneumônicos. A análise do número de copias de VNTR demonstrou uma elevada variabilidade...

Establishment of peritoneal liquid electrophoretogram from healthy horses and horses submitted to experimentally induced intestinal obstruction / Estabelecimento do eletroforetograma do líquido peritoneal de equinos hígidos e daqueles submetidos à obstrução intestinal experimental

The initial inflammatory stages of the colic syndrome include changes known as acute phase response. The aim of this study was to contribute with the establishment of reference values concerning the electrophoretogram of peritoneal liquid from healthy horses and horses submitted to experimentally induced intestinal obstruction. Twenty-one horses were allotted in four groups: duodenal obstruction (DG), ileum obstruction (IG), left-dorsal colon obstruction (MG), and control group (CG). Peritoneal liquid was sampled before obtruction (T0), with 3 hours of obstruction (T3) and 6, 30, 102 and 174 hours after desobstructing (T6, T30, T102 and T174, respectively). Total protein levels were determined by the biuret method and protein fractions were obtained by SDS-PAGE electrophoresis. The acute phase proteins (APP) identified were Immunoglobulin-A, ceruloplasmin, transferrin, albumin, α1-antitrypsin, heavy and light chains of immunoglobulin-G, haptoglobin, α1-acid glycoprotein and a still unnamed protein, which was called P24. There was no difference (P>0.3) in protein levels among groups, although a significant difference (P>0.05) was observed between distinct experimental moments in each group evidencing a higher response of the APP in the obstructed groups. The APP fractioning of the peritoneal liquid was standardized to establish a standard curve for healthy equines and those submitted to induced intestinal obstruction. Moreover, it was verified that the SDS-PAGE electrophoresis was sensitive and effective to help diagnose abdominal inflammatory processes...

Na cólica equina, os estágios iniciais da inflamação incluem alterações denominadas resposta de fase aguda. O objetivo deste estudo foi contribuir para o estabelecimento de valores de referência do proteinograma do líquido peritoneal de equinos hígidos e daqueles submetidos à obstrução intestinal experimental. Vinte e um animais foram distribuídos nos grupos: obstrução de duodeno (GD), íleo (GI), cólon dorsal esquerdo (GM) e controle instrumentado (GC). As colheitas das amostras de líquido peritoneal foram realizadas antes (T0), durante as obstruções (T3) e após as desobstruções (T6, T30, T102 e T174 horas). A proteína total foi determinada pelo método do biureto, e as frações proteicas obtidas por eletroforese em SDS-PAGE. Identificaram-se as proteínas de fase aguda (PFA): IgA, ceruloplasmina, transferrina, albumina, α1-antitripsina, cadeias pesada e leve de imunoglobulina-G, haptoglobina, alfa-1-glicoproteína ácida e uma proteína nominalmente não identificada, que foi chamada P24. Não houve diferença (P>0.3) nas concentrações proteicas entre os grupos, somente entre tempos dentro de cada grupo (P>0.05), evidenciando uma resposta maior das PFA dos grupos obstruídos. O fracionamento eletroforético das PFA, presentes no líquido peritoneal, foi padronizado de modo a estabelecer a curva-padrão para equinos hígidos e para aqueles submetidos à obstrução intestinal; ademais, verificou-se que o referido fracionamento proteico mostrou-se sensível e eficaz no auxílio ao diagnóstico de processos inflamatórios abdominais...

Proteinograma do soro lácteo de ovelhas da raça Santa Inês em diferentes fases de lactação / Proteinogram the whey protein of Santa Ines sheep breed in different stages of lactation

No presente estudo objetivou-se avaliar a influência das fases de lactação sobre o proteinograma do soro lácteo de ovelhas da raça Santa Inês. Foram acompanhadas ovelhas em sistema de criação semi-intensivo com o mesmo manejo higiênico, sanitário e nutricional avaliadas aos 15, 30, 60 e 90 dias após o parto (final da lactação e desmame). Procedeu-se ao exame clínico da glândula mámaria e triagem e cultivo bacteriológico. A triagem do material resultou em 44 amostras de leite de glândulas sadias baseadas no exame negativo simultâneo do CMT e do bacteriológico. Para a obtenção do soro lácteo utilizou-se solução de renina. O soro lácteo foi fracionado em alíquotas e mantido em freezer a -80°C para posterior separação das frações protéicas. Para determinação da proteína total do soro lácteo empregou-se o biureto. A separação das frações protéicas foi realizada utilizando-se eletroforese em gel de poliacrilamida contendo dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE). Foram observadas oito proteínas entre elas lactoferrina, albumina sérica, IgA, IgG ( IgG de cadeia pesada - IgG CP e IgG de cadeia leve - IgG CL), β-lactoglobulina, α-lactoalbumina e as proteínas identificadas como PM 15.000 Da e PM 29.000 Da. Não foi observada diferença significativa nas diferentes fases de lactação nas seguintes proteínas: IgA (P>0,3895), lactoferrina (P>0,1611), PM 29000 (P>0,4879), αlactoalbumina (P>0,0799) e PM 15000 (P>0,4494). Na proteína total (P<0,0022) e nas proteínas albumina (P<0,0377), IgG (P<0,0354) verificou-se variação significativa nos primeiros momentos de observação, na proteína β-lactoglobulina (P<0,0005) verificou-se variação significativa com diminuição dos 15 até 30 dias pós parto com elevação progressiva até a última fase de lactação (90 dias pós parto). A técnica de SDS-PAGE permitiu a quantificação de oito proteínas no soro lácteo de ovelhas sadias. As proteínas identificadas refletem o perfil do soro lácteo para a espécie ovina, havendo influência das fases da lactação na concentração albumina, IgG e β-lactoglobulina.

This study aimed to evaluate the influence of lactation phases on the proteinogram of whey protein in Santa Inês ewes. Ewes were accompanied in a semi-intensive system using the same sanitary and nutritional management evaluated at 15, 30, 60 and 90 days postpartum (end of weaning and lactation). Clinical examination of the mammary gland was carried out through and bacteriological culture. The screening of the material resulted in 44 milk samples of healthy glands concurrent negative by CMT and bacteriological culture exam. For obtaining the whey protein renin solution was used. The whey was fractionated into aliquots and kept in the -80C freezer to later separation of protein fractions. For determination of total protein of whey protein was employed the biuret, observing the linearity of the test. Separation of protein fractions was performed, using polyacrylamide gel containing sodium dodecyl sulfate (SDS-PAGE). Eigth protein were observed including lactoferrin, serum albumin, IgA, IgG (heavy chain IgG (IgG CP), light chain IgG (IgG CL), β-lactoglobulin, α-lactalbumin and proteins identified as PM 15000 and PM 29000. No significant difference was observed at different stages of lactation in the following protein: IgA (P>0.3895), lactoferrin (P>0.1611), PM 29000 (P>0.4879), α-lactalbumin (P>0.0799) and PM15000 (P>0.4494). In total protein (P<0.0022), albumin protein (P<0.0377) and IgG (P<0.0354) it was observed a significant variation in the first moments of observations, in the β-lactoglobulin protein (P<0.0005) there was significant variation with reduction of 15 to 30 days postpartum with progressive elevation until the last stage of lactation (90 days postpartum). The SDS-PAGE technique allowed the quantification of eigth whey proteins in health ewes. The protein fractions identified reflect the profile of whey to ovine species, with influence of stages of lactation in albumin, IgG and β-lactoglobulin.

Proteinograma sérico de bovinos da raça Curraleir / Serum protein concentration in Curraleiro bovine breed

Estudou-se o perfil eletroforético das proteínas séricas de bovinos sadios da raça Curraleiro por meio da técnica de eletroforese em gel de acrilamida contendo dodecil sulfato de sódio. Utilizaram-se amostras de soro sanguíneo de 228 bovinos da raça Curraleiro, 51 machos e 177 fêmeas, com idades entre sete meses e 12 anos, pertencentes a dois rebanhos localizados nos Estados de Goiás e Tocantins. Foram quantificadas proteína total e concentração plasmática de fibrinogênio. Verificaram-se variações nas concentrações das diferentes frações proteicas. Foram detectadas 26 proteínas e identificadas 10 delas. A ceruloplasmina esteve ausente em 78,1 por cento dos indivíduos, e a α-antitripsina não foi detectada em nenhum animal. Proteína total, globulina, IgA, IgG e fibrinogênio aumentaram com a idade e houve correlação positiva entre os níveis séricos de haptoglobina e α1-glicoproteína ácida.

The eletrophoretic serum protein profile in healthy Curraleiro bovine breed was studied by dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis. A total of 228 serum samples from Curraleiro cattle, being 51 males and 177 females were analyzed. They were from seven month to 12-year-old and were raised in two farms of Goiás and Tocantins states. Total protein and plasma fibrinogen quantification were performed. It was possible to verify variation in proteins fractions concentration. Twenty-six proteins were detected and ten of them were identified. Ceruloplasmin was absente in 78,10 percent of animals and α-antitrypsin was not detected. The total protein, globulin, IgA, IgG, and fibrinogen increased with age and there was a positive correlaction between haptoglobin and α1-acid glycoprotein.

Perfil eletroforético do proteinograma sérico de eqüinos com obstrução experimental do cólon menor / Eletrophoretic profile of serum proteinogram of equines with small colon experimental obstruction

Avaliaram-se as alterações do proteinograma sérico de eqüinos submetidos à isquemia e reperfusão do cólon menor por distensão intraluminal. Foram utilizados 10 animais submetidos à laparotomia pelo flanco, em posição quadrupedal, para a indução de obstrução no cólon menor durante um período de quatro horas. Cinco animais foram instrumentados, mas sem distensão (grupo controle - G1). Em cinco outros animais, foi realizada isquemia mural por distensão do cólon menor via manguito inflado com 40mmHg (grupo distendido - G2). Foram colhidas amostras de sangue antes da intervenção cirúrgica (M1), com 4 horas da colocação do manguito (M2) e com 3 horas (M3) e 12 horas (M4) de reperfusão. Após centrifugação e fracionamento das amostras, as proteínas de fase aguda foram separadas por eletroforese em gel de poliacrilamida contendo SDS-PAGE, e suas concentrações determinadas por densitometria computadorizada. Foram encontradas 19 proteínas no fracionamento eletroforético, com peso molecular variando de 185.000 a 14.000 Daltons (Da). Os pesos moleculares encontrados, correspondentes às proteínas mais conhecidas, foram ceruloplasmina, 130.000 Da; proteína C-reativa, 122.000 Da; transferrina, 85.000 Da; α1-antitripsina, 61.000 Da; haptoglobina, 47.000 Da; e glicoproteína ácida, 40.000 Da. Os resultados mostram que proteínas de fase aguda se alteram após o trauma cirúrgico.

The changes in the serum proteinogram of equines submitted to ischemia and reperfusion of small colon by intraluminal distension were evaluated. Ten horses were submitted to standing laparotomy to induce a small colon obstruction for four hours. Five animals were instrumented without distention (control group - G1). In another five animals, mural ischemia was promoted placing a latex balloon distended with 40mmHg into the small colon (distended group - G2). Blood samples were collected before the surgical procedures (M1) and 4h after the balloon placement (M2) and 3h (M3) and 12h (M4) after reperfusion. After centrifugation and fractioning of the samples, the acute phase proteins were separated by SDS-PAGE and their concentrations were determined by computer densitometry. Nineteen proteins were separated by eletrophoresis and the molecular weights ranged from 185,000 to 14,000 Dalton (Da). The found molecular weights, related to the most known proteins, were: ceruloplasmin, 130,000 Da; C-reactive protein, 122,000 Da; transferrin, 85,000 Da; α1-antitripsin, 61,000 Da; haptoglobin, 47,000 Da; and acid glycoprotein, 40,000 Da. The results showed that acute phase proteins changed after surgical injury.

Tipos eletroforéticos, de rotavírus bovino / Electrophoretic types of bovine rotaviruses

Em 27 amostras de material fecal de bezerros com diorréia, positivas para rotavírus através de ensaio imunoenzimático, estudou-se as características de migraçäo eletroforética do ARN viral, em comparaçäo com a amostra padräo Compton-England. Quatro tipos eletroforéticos, ou eletroferótios, foram observados e denominados, ao acoso, A, B, C e D. Encontrou-se 14 eletroferótipos D, 6 C, 4 A e 3 B. As principais diferenças foram observadas nas posiçöes relativas dos segmentos das classes I, II e II. Nenhuma diferença pode ser observada nos segmentos da classe IV, embora fossem diferentes dos da amostra padräo Compton-England. Estudo de maior número de amostras de rotavírus necessira ser realizado para se avaliar o significado das variaçöes do ARN vitral (au)